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过氧化氢检测试剂盒(荧光法)-O32图片
产品货号:
HR8837
中文名称:
过氧化氢检测试剂盒(荧光法)-O32
英文名称:
产品规格:
200T|400T
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
过氧化氢(H2O2,Hydrogen peroxide)是体内的一种活性氧(Reactive oxygen species,ROS)状态,参与细胞生长增殖、发育分化、衰老和凋亡以及许多生理和病理过程。
过氧化氢检测试剂盒是利用过氧化氢特异性荧光探针过氧化氢探针O32检测过氧化氢的试剂盒。过氧化氢探针O32 是合成的苯蒽类荧光探针,可以自由穿过细胞膜,进入细胞内后,与细胞内过氧化氢反应,被氧化生成绿色荧光物质,绿色荧光强度与细胞内过氧化氢水平成正比,检测绿色荧光就可以知道细胞内过氧化氢的变化情况。
在激发波长488 nm,发射波长526 nm 附近,使用荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、荧光分光光度计、荧光酶标仪、流式细胞仪等检测绿色荧光,从而测定细胞内过氧化氢水平。

储存条件:-20℃避光保存。
【注】:
● O32探针在2-8℃时是固体状态,从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴,变成液体状态后离心至管底部再开盖。
● 冬季气温较低时为凝固状态,极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解,变成液体状态后离心至管底部再开盖。
● 可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。吸头也需要放在培养箱预热,否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
有效期:一年。

※ ※ ※ 使用前请仔细阅读产品说明书 ※ ※ ※
使用限制:本试剂盒仅供科学研究使用,不可用于诊断或治疗。
产品更新:我公司会更新或升级产品,以优化和增强其使用性能,产品说明书会进行相应的版本更新。使用产品时,请参照随产品附带的说明书,不要参照网上下载的说明书,可能是不同的版本。需要最新电子版说明书时可以在收到产品后发邮件索取。
使用安全:使用时需要合适的实验室外套,一次性手套。避免皮肤或粘膜与试剂接触。如果试剂不小心接触皮肤或眼睛,应立即用水冲洗。

注意事项:
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖和管内壁上的液体离心至管底,避免开盖时试剂损失。
● 禁止与其他品牌的试剂混用,否则会影响使用效果。
● 样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。
● 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿,可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
● 实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。

产品特点:
● 使用方便:可用激光共聚焦显微镜直接观察、荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测;
● 背景低,灵敏度高;
●线性范围宽,使用方便。
试剂盒以外自备仪器和试剂耗材:
仪器:
● 激光共聚焦显微镜或荧光分光光度计或酶标仪或流式细胞仪,激发波长500±10 nm,发射波长530±10nm,或者按照FITC荧光检测条件检测。
● 离心机
● 移液器
● 冰箱
● 冰盒
试剂:
● PBS缓冲液(pH7.4,实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液)
●或者HBSS(With:Calcium Magnesium Glucose;Without:Phenol Red。)
耗材:
● 离心管 ● 吸头

使用方法:

使用注意事项:
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体收集至管底,避免开盖时液体洒落。
●荧光探针标记后,一定要洗净残余的未进入细胞内的探针,否则会导致背景较高。
● 探针标记完毕并洗净残余探针后,可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描,以确认探针的标记情况是否正常。
● 尽量缩短探针标记后到测定所用的时间,以减少各种可能的误差。
● 过氧化氢O32 在光照和空气中易被氧化,注意避光密封保存。
● O32染色工作液必须现配现用,并且在当天用完。
● O32对湿度非常敏感,若是O32 溶液每次取完需要量后,必须紧紧密封盖子。建议根据单次用量,分装密封保存。不可使用含水的吸头。
●对不同的细胞和组织,应选择合适的孵育时间和浓度,以观察过氧化氢的变化,很多细胞内的过氧化氢绝对水平较低,需要根据实际情况适当延长孵育时间。
● 过氧化氢O32探针可以根据需要的用量分装后冻存,避免反复冻融。
● 过氧化氢O32不可以一次性全部稀释后长期保存不用,稀释后稳定性变差,有效期缩短。
过氧化氢探针O32配制:
根据样本数量计算需要的用量,用探针稀释液5 倍稀释过氧化氢O32 探针后充分混匀,避光保存备用。
稀释后的过氧化氢O32荧光探针最好在一个月内用完,尽量避免反复冻融。
【注】:
● 可以不用试剂盒的稀释液,直接用HBSS或不含血清的培养基稀释。
过氧化氢O32 探针标记:
1.过氧化氢O32 溶液可在新鲜无血清培养基、HBSS缓冲盐溶液或组织灌流液中稀释到所需浓度,终浓度按试剂盒的母液的200-1000倍稀释,以此染色液更换细胞培养液或灌流液;也可直接向无血清细胞孵育液体或灌流液中加入过氧化氢O32探针溶液至所需浓度。
2.依据细胞过氧化氢含量的不同,过氧化氢O32探针终浓度可选择在200-1000倍稀释的范围,一般500 倍稀释即可。孵育时间可选择1-4 小时,在37℃或室温进行避光孵育。
3.孵育结束后,用PBS 等新鲜溶液清洗细胞或组织。漂洗时间要短。
荧光显微镜观察:
1.对贴壁生长细胞或活组织,可直接在荧光显微镜下观察;对悬浮生长细胞,取25-50μl细胞悬液滴到一张显微载玻片上,再盖上一张盖玻片。
2.荧光显微镜下观察。
流式细胞仪分析:
1.对贴壁生长细胞,用胰酶消化制备成单细胞悬液;对悬浮生长细胞,直接收集细胞。用0.5~1ml冰冷PBS重悬细胞(5~10 万)。
2.采用488nm 波长激发,测定待测细胞平均荧光强度。使用488nm 激发波长,525nm发射波长,实时或逐时间点检测刺激前后荧光的强弱。探针O32 的荧光光谱和FITC非常相似,可以用FITC 的参数设置检测探针O32产物。
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